top of page

TREBALL REALITZAT AL CRG

 

Per a determinar el genotip dels individus en la posició 145 del gen TAS2R38, que correspon a la capacitat de tastar la PTC, es realitzen quatre tècniques de laboratori a les mostres de saliva de sis persones alcohòliques: extracció de DNA, PCR, digestió amb enzims de restricció i electroforesi.

 

  • L’extracció de DNA a partir d’una mostra de saliva permet aïllar el material genètic dels individus objecte de l’estudi de la resta de substàncies i components cel·lulars.

 

 

  • L’objectiu de realitzar la Reacció en Cadena de la Polimerasa és multiplicar el material genètic de les mostres (i en concret el gen d’interès) per tal que es pugui manipular posteriorment per a dur a terme correctament la digestió amb els enzims de restricció i es puguin observar els resultats obtinguts en fer l’electroforesi.

La DNA polimerasa més utilitzada és l’enzim Taq polymerase, que és purificat a partir del bacteri Thermus aquaticus. Aquest és estable a temperatures properes als 100 ºC.

 

 

  • Els enzims de restricció són capaços de tallar el DNA, un cop amplificat, per una seqüència determinada. En el nostre cas, l’enzim utilitzat és el Hae III, que talla la seqüència de l’al·lel dominant (tastador) 5’-...GGCGGCCACT...-3’ i queda 5’-...GGCGG - CCACT...- 3’, amb la corresponent cadena complementària també tallada.

Després del tall, els extrems són de tipus rom, no cohesius. En canvi, l’al·lel recessiu queda intacte, ja que els enzims no troben els nucleòtids corresponents per tallar perquè la cadena té un polimorfisme d’un nucleòtid en la posició 145, que és el que volem observar. La seqüència amb l’SNP (subratllat) és 5’-...GGCGGGCACT...-3’. D’aquesta manera, és més llarga (221 parells de bases) i no avançarà tant en el gel de l’electroforesi com les cadenes tallades de l’al·lel dominant, que seran de menor pes molecular (una part de les cadenes serà de 177 pb i l’altra de 44 pb).

 

  • L’electroforesi permet separar i visualitzar els diferents fragments obtinguts de la PCR i tractats posteriorment amb enzims de restricció, segons la seva mida i el seu pes molecular. Per tant, es podrà saber quins al·lels presenta cada mostra.


Malauradament, no s’ha pogut aplicar aquesta metodologia a una mostra representativa de persones alcohòliques perquè la limitació de l’estada dels alumnes d’Educació Secundària al CRG no ho permetia. Per aquest motiu, només s’ha pogut analitzar el genotip d’un individu alcohòlic, de sexe masculí.

 

 

Tot seguit us adjuntem les bases d'orientació dels processos duts a terme al laboratori:

 

 

bottom of page